Produk

Kami baru-baru ini melaporkan bahawa nukleotida pirena lebih disukai dimasukkan bertentangan dengan tapak abas, 3'-T dimer timin, dan kebanyakan bes yang tidak rosak oleh yis DNA polimerase eta (pol eta).Oleh kerana pirena ialah molekul bukan kutub tanpa kebolehan ikatan H, kecekapan tinggi luar biasa pemasukan dPMP disifatkan sebagai keupayaan susun asasnya yang unggul, dan menekankan kepentingan penyusunan asas dalam pemilihan nukleotida oleh pol eta.Untuk menyiasat peranan geometri pasangan H dan pasangan asas dalam pemilihan nukleotida oleh pol eta, kami menentukan kecekapan sisipan nukleotida 2,6-diaminopurine, 2-aminopurine, 6-chloropurine, dan inosin yang diubah suai bes. buat bilangan ikatan-H yang berbeza dengan tapak templat bergantung pada geometri pasangan asas.Gandingan asas Watson-Crick nampaknya memainkan peranan penting dalam pemilihan analog nukleotida untuk sisipan bertentangan C dan T seperti yang dibuktikan oleh penurunan dalam kecekapan sisipan relatif dengan penurunan bilangan ikatan Watson-Crick H dan peningkatan dalam bilangan interaksi penderma-penderma dan penerima-penerima.Selektiviti pemasukan nukleotida adalah lebih besar bertentangan dengan 5'-T daripada 3'-T dimer timin, selaras dengan kerja sebelumnya yang mencadangkan bahawa 5'-T dipegang lebih tegar daripada 3'-T.Tambahan pula, sisipan A bertentangan dengan kedua-dua T dimer nampaknya dimediasi oleh pasangan asas Watson-Crick dan bukan oleh pasangan asas Hoogsteen berdasarkan kecekapan sisipan yang hampir sama bagi A dan 7-deaza-A, yang terakhir tidak mempunyai H- keupayaan ikatan pada N7.Kecekapan relatif untuk memasukkan nukleotida yang boleh membentuk pasangan asas Watson-Crick selari dengan serpihan Klenow, manakala serpihan Klenow lebih kuat mendiskriminasikan ketidakpadanan, selaras dengan selektiviti bentuknya yang lebih besar.Keputusan ini menggariskan kepentingan geometri pasangan asas ikatan-H dan Watson-Crick dalam pemilihan nukleotida oleh kedua-dua pol eta dan serpihan Klen ow, dan peranan pemilihan bentuk yang lebih kecil dalam penyisipan oleh pol eta kerana ia lebih terbuka dan kurang. tapak aktif terhalang.