Produk

Untuk mengukur secara khusus beberapa metabolit 5-fluorouracil (5-FU) dan dua nukleotida monofosfat endogen, kami membangunkan kaedah asal berdasarkan spektrometri jisim kromatografi-tandem cecair (LC-MS/MS).Ujian ini membenarkan penentuan: (i) pengeluaran intraselular 5-fluoro-2'-deoxyuridine-5'-monophosphate (5-FdUMP) daripada 5-FU atau 5-fluoro-2'-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) kesan kepekatan 5-FdUMP pada nisbah 2'-deoxyuridine-5'-monophosphate (dUMP)/thymidine-5'-monophosphate (TMP) intraselular, dan (iii) tahap rembesan 5-FdUMP dan 5-FU daripada sel kultur manusia oleh pengangkut ABC.Di bawah keadaan percubaan kami, sel telah diinkubasi dengan 5-FU atau 5-FUrd.Kemudian, protein selular dicetuskan oleh metanol.Prosedur ini menyediakan pemulihan pengekstrakan yang tinggi.Di samping itu, untuk mengukur rembesan 5-FU dan 5-FdUMP daripada sel, kami menjalankan kuantifikasi molekul ini dalam medium kultur.Media sama ada disuntik terus (5-FU) atau di bawah pengekstrakan fasa pepejal menggunakan kartrij pengekstrakan Lilin Oasis (5-FdUMP).Pengasingan analit dilakukan pada lajur dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) dengan mod isokratik menggunakan penimbal format ammonium/metanol/air (5/5/90, v/v) sebagai fasa mudah alih.Masa larian tidak melebihi 6.2 min.Analit diionkan dalam antara muka penyembur elektro di bawah mod ion negatif.Kami mengesahkan kaedah dalam julat 2.5-150 ng mL -1 mengikut sebatian.Kebolehubahan intra dan antara ujian adalah lebih rendah daripada 10% dalam tempoh tujuh hari.Semua sebatian adalah stabil dalam sel atau dalam medium kultur apabila sampel disimpan pada suhu -20 ° C selama sekurang-kurangnya dua minggu, dan selepas tiga kitaran pencairan beku.Tiada kesan matriks diperhatikan dalam kedua-dua media.