Produk

Monogalactopyranosides fluorescein dan fluorescein metil ester: sintesis, hidrolisis enzimatik oleh biotnylated β-galactosidase, dan penentuan pekali resapan translasi

Monoglycosides fluorescein (d-galactopyranoside (FMG) dan d-glucopyranoside) dan metil ester (MFMG) mereka telah disediakan daripada acetobromoglucose/galactose dan fluorescein metil ester dalam hasil yang baik.Eksperimen hidrolisis enzimatik (menggunakan biotinilasi β-galactosidase) bagi derivatif galakto telah dilakukan dan parameter kinetik telah dikira.Peningkatan 15-20 kali ganda keamatan pendarfluor telah diperhatikan semasa hidrolisis.Peningkatan linear pendarfluor telah diperhatikan pada masa yang singkat dan kepekatan substrat yang rendah, menjadikan sebatian ini berguna dan probe sensitif untuk galaktosidase.Magnitud nilai pemalar Michaelis–Menten (Km) untuk MFMG adalah lebih tinggi daripada FMG yang mencadangkan kemungkinan perubahan konformasi substrat fluorogenik.Nilai Km untuk β-Gal terbiotinilasi dengan FMG adalah lebih rendah daripada untuk enzim asli.Pemerhatian ini menunjukkan pertalian substrat yang lebih tinggi bagi enzim terbiotinilasi berbanding dengan enzim asli.Pekali resapan translasi telah diukur, untuk kedua-dua substrat fluorogenik dan kedua-dua produk, menggunakan spektroskopi korelasi pendarfluor.Pekali resapan translasi untuk substrat fluorogenik dan produk hidrolisis enzimatik telah diukur untuk serupa, dalam julat 3.5–4.5 × 10−10 m2 s−1.Oleh itu, peningkatan atau keterlambatan kinetik enzimatik disebabkan oleh perbezaan mobiliti translasi substrat dan produk tidak begitu ketara.