Produk

X-gal (juga disingkat BCIG untuk 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside) ialah sebatian organik yang terdiri daripada galaktosa yang dikaitkan dengan indole yang digantikan.Kompaun ini telah disintesis oleh Jerome Horwitz dan rakan usaha sama pada tahun 1964. Nama kimia formal sering dipendekkan kepada frasa yang kurang tepat tetapi juga kurang rumit seperti bromochloroindoxyl galactoside.X daripada indoksil mungkin merupakan sumber X dalam penguncupan X-gal.X-gal sering digunakan dalam biologi molekul untuk menguji kehadiran enzim, β-galactosidase, di tempat sasaran biasa, β-galactosidase.Ia juga digunakan untuk mengesan aktiviti enzim ini dalam histokimia dan bakteriologi.X-gal ialah salah satu daripada banyak indoksil glikosida dan ester yang menghasilkan sebatian biru tidak larut serupa dengan pewarna indigo hasil daripada hidrolisis bermangkin enzim.

X-gal ialah analog laktosa, dan oleh itu boleh dihidrolisiskan oleh enzim β-galactosidase yang memecahkan ikatan β-glikosidik dalam D-laktosa.X-gal, apabila dibelah oleh β-galactosidase, menghasilkan galaktosa dan 5-bromo- 4-chloro-3-hydroxyindole - 1. Yang terakhir kemudiannya secara spontan dimerisasi dan dioksidakan kepada 5,5'-dibromo-4,4'-dichloro -indigo - 2, produk biru pekat yang tidak larut.X-gal itu sendiri tidak berwarna, oleh itu kehadiran produk berwarna biru boleh digunakan sebagai ujian untuk kehadiran β-galactosidase aktif.Ini juga membolehkan β-galactosidase bakteria (dipanggil lacZ ) digunakan sebagai pelapor dalam pelbagai aplikasi.

Dalam analisis dua-hibrid, β-galactosidase boleh digunakan sebagai wartawan untuk mengenal pasti protein yang berinteraksi antara satu sama lain.Dalam kaedah ini, perpustakaan genom boleh disaring untuk interaksi protein menggunakan sistem yis atau bakteria.Jika terdapat interaksi yang berjaya antara protein yang disaring, ia akan mengakibatkan pengikatan domain pengaktifan kepada promoter.Jika promoter dikaitkan dengan gen lacZ, pengeluaran β-galactosidase, yang mengakibatkan pembentukan koloni berpigmen biru dengan kehadiran X-gal, oleh itu akan menunjukkan interaksi yang berjaya antara protein.Teknik ini mungkin terhad kepada menyaring perpustakaan yang bersaiz kurang daripada sekitar 106. Pembelahan X-gal yang berjaya juga menghasilkan bau busuk yang ketara disebabkan oleh volatilisasi indole.

Oleh kerana X-gal itu sendiri tidak berwarna, kehadiran produk berwarna biru boleh digunakan sebagai ujian untuk kehadiran β-galactosidase aktif.

Pengecaman mudah enzim aktif ini membolehkan gen untuk βgalactosidase (gen lacZ) digunakan sebagai gen pelapor dalam pelbagai aplikasi.