Terdapat ramai wira yang tidak didendang di sekeliling kita, yang kelihatan biasa-biasa sahaja, tetapi sebenarnya mereka secara senyap banyak menyumbang kepada kita.Proteinase K ialah "wira yang tidak didendang" dalam industri diagnostik molekul, walaupun berbanding dengan "besar dan berkuasa" dalam industri, proteinase K adalah sangat rendah sehingga kita telah lama mengabaikan kepentingannya.Dengan tercetusnya wabak mahkota baru, permintaan untuk proteinase K telah melonjak, dan bekalan di dalam dan luar negara jauh di belakang penggunaan, dan semua orang tiba-tiba menyedari bahawa proteinase K sangat penting.
Apakah kegunaan proteinase K
Proteinase K ialah protease serin dengan aktiviti enzim proteolitik dan boleh mengekalkan aktiviti dalam pelbagai persekitaran (pH (4-12.5), penimbal garam tinggi, suhu tinggi 70°C, dll.).Di samping itu, aktiviti proteinase K tidak dihalang oleh SDS, urea, EDTA, guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, dan lain-lain, dan sejumlah detergen juga boleh meningkatkan aktiviti proteinase K. Dalam rawatan perubatan (pembasmian kuman virus dan mikrob. ), makanan (pelembutan daging), kulit (melembutkan rambut), pembuatan wain (penjelasan alkohol), penyediaan asid amino (bulu terdegradasi), pengekstrakan asid nukleik, hibridisasi in situ, dll., proteinase K Terdapat aplikasi.Aplikasi yang paling biasa digunakan ialah pengekstrakan asid nukleik.
Proteinase K boleh menzimolisis semua jenis protein dalam sampel, termasuk histon yang terikat rapat dengan asid nukleik, supaya asid nukleik boleh dibebaskan daripada sampel dan dilepaskan ke dalam ekstrak, memudahkan langkah pengekstrakan dan penulenan seterusnya.Dalam pengesanan asid nukleik virus, proteinase K adalah salah satu komponen penting dalam penyelesaian pensampelan virus.Proteinase K boleh memecahkan dan menyahaktifkan protein kot virus, yang lebih selamat semasa peringkat pengangkutan dan pengesanan;selain itu, proteinase K juga boleh merendahkan RNase menghalang degradasi RNA virus dan memudahkan pengesanan asid nukleik.
Kemasyhuran semalaman proteinase K
Sama ada dalam bidang penyelidikan saintifik atau dalam bidang IVD, pengekstrakan asid nukleik adalah eksperimen yang paling asas, jadi proteinase K sentiasa menjadi kewujudan yang sangat penting.Walau bagaimanapun, pada masa lalu, proteinase K jauh kurang dikenali daripada peranannya.Sebahagian besar daripada ini adalah kerana hubungan bekalan dan permintaan proteinase K adalah sangat stabil.Beberapa orang akan berfikir bahawa bekalan proteinase K akan menjadi masalah.
Dengan tercetusnya wabak mahkota baharu, permintaan untuk ujian asid nukleik telah melonjak.Sehingga akhir Jun 2020, China telah menyelesaikan hampir 90 juta ujian mahkota baharu, dan jumlah ini lebih membimbangkan pada skala global.Dalam eksperimen pengekstrakan asid nukleik, kepekatan kerja proteinase K adalah kira-kira 50-200 μg/mL.Secara amnya, diperlukan kira-kira 100 μg proteinase K untuk mengekstrak sampel asid nukleik.Dalam penggunaan sebenar, untuk meningkatkan kecekapan pengekstrakan asid nukleik, selalunya Proteinase K akan digunakan dalam jumlah yang meningkat.Pengesanan asid nukleik coronavirus baru telah membawa sejumlah besar permintaan proteinase K.Imbangan bekalan dan permintaan asal proteinase K telah dipecahkan dengan cepat, dan proteinase K menjadi bahan pencegahan wabak yang penting dalam sekelip mata.
Kesukaran dalam penghasilan proteinase K
Walaupun dengan perkembangan wabak itu, nilai penting proteinase K telah dinilai oleh orang ramai, adalah memalukan bahawa disebabkan oleh kunci rendah proteinase K yang berlebihan, beberapa syarikat domestik telah terlibat dalam pengeluaran proteinase K. Apabila orang ramai ingin mewujudkan pengeluaran proteinase K Semasa proses pengeluaran, didapati bahawa proteinase K adalah protein yang sangat istimewa.Ia amat mencabar untuk mengembangkan kapasiti pengeluaran proteinase K dalam tempoh yang singkat.
Pengeluaran proteinase K secara besar-besaran menghadapi kesukaran berikut
1. Ekspresi rendah
Proteinase K boleh secara tidak spesifik merendahkan kebanyakan protein dan menyebabkan ketoksikan yang serius kepada sel hos ekspresi.Oleh itu, tahap ekspresi proteinase K secara amnya sangat rendah.Penyaringan sistem ekspresi dan strain yang sangat mengekspresikan proteinase K secara amnya memerlukan kitaran yang lebih panjang.
2. Sisa pigmen dan asid nukleik
Penapaian berskala besar memperkenalkan sejumlah besar pigmen dan sisa asid nukleik perumah.Sukar untuk membuang kekotoran ini dengan proses penulenan yang mudah, dan penulenan kompleks meningkatkan kos dan mengurangkan kadar pemulihan.
3. Ketidakstabilan
Proteinase K tidak cukup stabil, ia boleh mengenzimolisis dirinya sendiri, dan sukar untuk menyimpannya secara stabil pada suhu 37°C untuk masa yang lama tanpa agen pelindung.
4. Mudah mendap
Apabila menyediakan serbuk proteinase K yang dikeringkan beku, untuk memastikan kandungan pepejal proteinase K dalam serbuk kering beku adalah besar, adalah perlu untuk menambah agen pelindung kering beku pada kepekatan yang tinggi, tetapi apabila kepekatan proteinase K mencapai 20mg/mL dan ke atas, ia adalah mudah Pengagregatan membentuk mendakan, yang membawa kesukaran besar kepada pengeringan beku proteinase K dengan kandungan pepejal yang tinggi.
5. Pelaburan yang besar
Proteinase K mempunyai aktiviti protease yang kuat dan boleh menghidrolisis protease lain dalam makmal.Oleh itu, proteinase K memerlukan kawasan pengeluaran khusus, peralatan dan kakitangan untuk penyelidikan dan pembangunan serta pengeluaran.
XD larutan proteinase K BIOCHEM
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
Penyelesaian teknikal XD BIOCHEM termasuk
Menggunakan integrasi plasmid berbilang salinan, strain ekspresi tinggi dengan tahap ekspresi 8g/L dipilih, yang mengatasi masalah tahap ekspresi rendah proteinase K;
Melalui penubuhan proses penulenan berbilang langkah, sisa sitokrom perumah dan asid nukleik proteinase K berjaya dikeluarkan di bawah nilai standard;
Melalui penyaringan tinggi rumusan penimbal pelindung, penimbal yang boleh menyimpan proteinase K secara stabil pada 37°C telah dipilih;
Penampan saringan mengatasi masalah bahawa proteinase K mudah teragregat dan mendakan pada kepekatan tinggi, dan meletakkan asas untuk pengeringan beku kandungan pepejal tinggi proteinase K.
XD BIOCHEM proteinase K sampel
Ujian kestabilan XD BIOCHEM proteinase K: tidak akan ada perubahan ketara dalam aktiviti selepas 80 hari pada suhu bilik
Ujian kestabilan XD BIOCHEM proteinase K: tidak akan ada perubahan ketara dalam aktiviti selepas 80 hari pada suhu bilik
Perbandingan kesan pengekstrakan asid nukleik XD BIOCHEM proteinase K dan produk pesaing.Dalam proses pengekstrakan asid nukleik, XD BIOCHEM dan proteinase K kompetitif digunakan masing-masing.Kecekapan pengekstrakan XD BIOCHEM proteinase K lebih tinggi dan nilai Ct gen sasaran lebih rendah.
Masa siaran: Dis-31-2021