Produk

Protein ORF45 herpesvirus berkaitan sarcoma Kaposi (KSHV) ialah protein tegumen awal segera yang khusus gammaherpesvirus.Kajian terdahulu kami telah mendedahkan peranan pentingnya dalam kedua-dua peringkat awal dan akhir jangkitan KSHV.Dalam kajian ini, kami meninjau interaksi ORF45 menggunakan panel antibodi monoklonal.Sebagai tambahan kepada protein kinase terkawal ekstraselular (ERK) dan p90 ribosomal S6 kinase (RSK) yang dikenal pasti sebelumnya, kami mendapati beberapa protein copurified lain, termasuk yang menonjol ~ 38 kDa dan ~ 130 kDa.Spektrometri jisim mendedahkan bahawa protein 38-kDa adalah virus ORF33 dan protein 130-kDa adalah selular USP7 (protease khusus ubiquitin 7).Kami memetakan domain pengikat ORF33 kepada 19 asid amino (aa) karboksil terminal yang sangat terpelihara ORF45 dan domain pengikat USP7 kepada motif konsensus yang dilaporkan di kawasan tengah ORF45.Menggunakan pewarnaan imunofluoresensi, kami memerhatikan pengkolokalisasian ORF45 dengan ORF33 atau USP7 kedua-duanya di bawah keadaan transfeksi dan dalam sel yang dijangkiti KSHV.Selain itu, kami melihat penempatan semula yang bergantung kepada ORF45 sebahagian daripada ORF33/USP7 dari nukleus ke sitoplasma.Kami mendapati bahawa ORF45 menyebabkan peningkatan dalam pengumpulan protein ORF33 yang telah dimansuhkan jika sama ada domain pengikat ORF33- atau USP7 dalam ORF45 telah dipadamkan.Tambahan pula, pemadaman terminal karboksil terpelihara ORF45 dalam genom KSHV secara drastik mengurangkan tahap protein ORF33 dalam sel yang dijangkiti KSHV dan memansuhkan pengeluaran virion keturunan.Secara kolektif, keputusan kami bukan sahaja mendedahkan komponen baharu interaksi ORF45, tetapi juga menunjukkan bahawa interaksi antara protein ini adalah penting untuk replikasi litik KSHV. Herpesvirus berkaitan sarkoma Kaposi (KSHV) ialah agen penyebab beberapa kanser manusia.KSHV ORF45 ialah protein pelbagai fungsi yang diperlukan untuk replikasi litik KSHV, tetapi mekanisme tepat yang ORF45 melaksanakan fungsi kritikalnya tidak jelas.Kajian terdahulu kami mendedahkan bahawa semua pr otein ORF45 dalam sel wujud dalam kompleks berat molekul tinggi.Oleh itu, kami berusaha untuk mencirikan interaksi ORF45 untuk memberikan pandangan tentang peranannya semasa replikasi litik.Menggunakan panel antibodi monoklonal, kami meninjau interaksi ORF45 dalam sel yang dijangkiti KSHV.Kami mengenal pasti dua rakan kongsi pengikat baharu ORF45: protein virus ORF33 dan protease khusus ubiquitin selular 7 (USP7).Kami selanjutnya menunjukkan bahawa interaksi antara ORF45 dan ORF33 adalah penting untuk pengeluaran zarah virus KSHV yang cekap, menunjukkan bahawa gangguan yang disasarkan dengan interaksi ini mungkin mewakili strategi baru untuk menghalang replikasi litik KSHV.