Produk

Fosforilasi protein mengawal fungsi selular yang pelbagai dan memainkan peranan penting dalam perkembangan awal tumbuhan.Untuk melengkapkan dan mengembangkan penyiasatan sebelumnya mengenai fosforilasi protein dalam anak benih Arabidopsis, kami menggunakan pendekatan alternatif yang menggabungkan pengekstrakan protein di bawah keadaan tidak denaturasi dengan kromatografi afiniti ion logam (IMAC) yang tidak bergerak bagi fosfoprotein utuh dalam ekstrak yang telah habis Rubisco, diikuti dengan pengenalan. menggunakan elektroforesis gel dua dimensi (2-DE) dan spektrometri jisim tandem kromatografi cecair (LC-MS/MS).Pencernaan trypsin dalam gel dan analisis bintik-bintik gel terpilih mengenal pasti 144 peptida dan residu terfosforilasi, di mana hanya 18 fosfopeptida dan 8 fosfosit ditemui dalam pangkalan data tapak fosforilasi PhosPhAt 4.0 dan P3DB Arabidopsis thaliana.Lebih separuh daripada 82 fosfoprotein yang dikenal pasti terlibat dalam metabolisme karbohidrat, fotosintesis/respirasi atau sms mekanik tindak balas tekanan oksidatif.Pengayaan fosfoprotein utuh sebelum 2-DE dan LC-MS/MS nampaknya meningkatkan pengesanan threonine dan residu tirosin terfosforilasi berbanding dengan kaedah yang menggunakan pengayaan peringkat peptida, menunjukkan bahawa kedua-dua pendekatan itu agak saling melengkapi dari segi liputan tapak fosforilasi.Membandingkan keputusan untuk anak benih muda dengan yang diperoleh sebelum ini untuk daun Arabidopsis matang mengenal pasti lima protein yang berbeza fosforilasi dalam tisu ini, menunjukkan potensi teknik ini untuk menyiasat dinamik fosforilasi protein semasa pembangunan tumbuhan.