Produk

Ujian kromatografi cecair berprestasi tinggi baharu untuk glikosiltransferase berdasarkan derivatisasi dengan pengesanan asid antranilik dan pendarfluor.

Ujian telah dibangunkan menggunakan kimia pelabelan unik asid 2-aminobenzoik (2AA; asid anthranilic, AA) untuk mengukur aktiviti kedua-dua β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) dan α2-6 sialyltransferase (ST-6) oleh cecair berprestasi tinggi kromatografi (HPLC) dengan pengesanan pendarfluor (Anumula KR. 2006. Kemajuan dalam kaedah derivatisasi pendarfluor untuk analisis kromatografi cecair berprestasi tinggi bagi karbohidrat glikoprotein. Biokim Dubur. 350:1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) dan N-acetyllactosamine digunakan sebagai penerima dan uridin difosfat (UDP)-galaktosa dan asid cytidine monofosfat (CMP)-N-asetilneuraraminik (NANA) sebagai penderma untuk GalT-1 dan ST-6, masing-masing.Produk enzimatik dilabelkan in situ dengan AA dan dipisahkan daripada substrat pada lajur TSKgel Amide 80 menggunakan keadaan fasa normal.Unit enzim ditentukan dari kawasan puncak dengan perbandingan dengan piawaian terbitan serentak Gal-β1-4GlcNAc dan NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Lineariti (masa dan kepekatan enzim), ketepatan (intra- dan interassay) dan kebolehulangan untuk ujian telah ditubuhkan.Ujian didapati berguna dalam memantau aktiviti enzim semasa pengasingan dan penulenan.Ujian adalah sangat sensitif dan dilakukan sama atau lebih baik daripada pengukuran berasaskan gula radioaktif tradisional.Format ujian juga boleh digunakan untuk mengukur aktiviti pemindahan lain, dengan syarat penerima karbohidrat mengandungi hujung pengurangan untuk pelabelan.Ujian untuk penerima glikoprotein telah dibangunkan menggunakan IgG.Kaedah pemprofilan HPLC pendek telah dibangunkan untuk pemisahan glycans IgG (bintennary G0, G1, G2, mono- dan disialylasi), yang memudahkan penentuan aktiviti GalT-1 dan ST-6 dengan cepat.Tambahan pula, kaedah pemprofilan ini harus terbukti berguna untuk memantau perubahan dalam glycans IgG dalam tetapan klinikal.