Produk

Analisis peristiwa fosforilasi seluruh proteom masih merupakan cabaran analisis utama kerana kerumitan besar rangkaian fosforilasi protein.Dalam kerja ini, kami menilai pelengkap Lys-N, Lys-C, dan trypsin berkenaan dengan keupayaan mereka untuk menyumbang kepada analisis global fosfoproteom.Versi halus pertukaran kation kuat pH rendah digunakan untuk memisahkan peptida asetilasi, terfosforilasi dan tidak diubahsuai secara cekap.Sebanyak 5036 fosfopeptida tidak berlebihan boleh dikenal pasti dengan kadar penemuan palsu <1% daripada 1 mg protein menggunakan gabungan tiga enzim.Data kami mendedahkan bahawa pertindihan antara set data fosfopeptida yang dihasilkan dengan protease yang berbeza adalah marginal, manakala pertindihan antara dua set data tryptic yang dihasilkan sama didapati sekurang-kurangnya 4 kali lebih tinggi.Dengan cara ini, penggunaan selari Lys-N dan trypsin membolehkan peningkatan 72% dalam bilangan fosfopeptida yang dikesan berbanding d dengan trypsin sahaja, manakala percubaan replika trypsin hanya membawa kepada peningkatan 25%.Oleh itu, apabila memberi tumpuan semata-mata pada data trypsin dan Lys-N, kami mengenal pasti 4671 fosfopeptida tidak berlebihan.Analisis lanjut mengenai tapak yang dikesan menunjukkan bahawa set data Lys-N dan trypsin telah diperkaya dalam motif fosforilasi yang jauh berbeza, seterusnya membuktikan bahawa pendekatan multiprotease sangat berharga dalam analisis fosfoproteom.