Produk

Topologi membran domain saluran colicin E1 telah dikaji oleh pemindahan tenaga resonans pendarfluor (FRET).FRET melibatkan asid amino pendarfluor (coumarin) yang dikodkan secara genetik sebagai penderma dan residu sistein berlabel terpilih yang ditambat dengan DABMI (4-(dimethylamino)phenylazophenyl-4'-maleimide) sebagai penerima FRET.Sisa kumarin pendarfluor telah dimasukkan ke dalam protein melalui pasangan tRNA/aminoacyl-tRNA synthetase ortogonal yang membenarkan penggabungan terpilih ke mana-mana tapak dalam domain saluran colicin.Setiap varian mempunyai mutasi berhenti (TAG) untuk penggabungan kumarin dan mutasi sistein (TGT) untuk lampiran DABMI.Enam jarak antara heliks dalam heliks 1-6 ditentukan menggunakan analisis FRET untuk kedua-dua keadaan larut dan terikat membran.Data FRET menunjukkan perubahan besar dalam jarak antara heliks antara heliks 3-6 apabila perkaitan membran memberikan pandangan baharu ke dalam struktur terikat membran domain saluran.Secara amnya, kecekapan interhelik coumarin-DABMI FRET berkurangan apabila mengikat membran, membina model payung untuk saluran colicin.Model tentatif untuk keadaan tertutup domain saluran telah dibangunkan berdasarkan data FRET semasa dan diterbitkan sebelum ini.Model ini mencadangkan susunan bulatan heliks 1-7 mengikut arah jam dari sisi ekstraselular dan perkaitan antara muka membran heliks 1, 6, 7, dan 10 di sekeliling jepit rambut transmembran pusat yang dibentuk oleh heliks 8 dan 9.