Produk

Cara kesan mutasi serentak bergabung untuk mengubah aktiviti enzimatik tidak mudah diramalkan kerana kesan ini tidak selalunya aditif secara linear.Oleh itu, pencirian kesan mutasi serentak sisa asid amino yang mengikat substrat boleh memberi sumbangan penting kepada pemahaman tentang kekhususan substrat enzim.Dalam beta-glikosidase daripada Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), kedua-dua residu Q39 dan E451 berinteraksi dengan substrat dan ini penting untuk menentukan kekhususan substrat.Mutan berganda Sfbetagly (A451E39, S451E39 dan S451N39) telah disediakan oleh mutagenesis terarah tapak, dinyatakan dalam bakteria dan disucikan menggunakan kromatografi afiniti.Enzim ini dicirikan menggunakan p-nitrophenyl beta-galactoside dan p-nitrophenyl beta-fucoside sebagai substrat.Nisbah k cat/Km untuk mutan tunggal dan berganda Sfbetagly yang mengandungi mutasi terarah tapak pada kedudukan Q39 dan E451 digunakan untuk menunjukkan bahawa kesan ke atas tenaga bebas keris ESdouble (kompleks keadaan peralihan enzim) bagi mutasi berganda (Gdouble daggerxy) bukan jumlah kesan yang terhasil daripada mutasi tunggal (Gdouble daggerx dan Gdouble daggery).Perbezaan dalam keris Gdouble ini menunjukkan bahawa kesan mutasi tunggal sebahagiannya bertindih.Oleh itu, kesan biasa ini hanya dikira sekali dalam Gdouble daggerxy.Data kristalografi pada beta-glikosidase mendedahkan kehadiran ikatan hidrogen bidentat yang melibatkan sisa Q39 dan E451 dan kumpulan hidroksil substrat yang sama.Oleh itu, kedua-dua data termodinamik dan kristalografi mencadangkan bahawa sisa Q39 dan E451 memberi pengaruh bersama ke atas interaksi masing-masing dengan substrat.